1．I实验材料与仪器
(1)材料．原料为荣成市人工养殖厂的干海带，D101大孔吸附树脂(G药集团化学试剂有限公司)D72型犬孔强酸性苯乙烯系鼷离子交换树脂、D315弱碱缝苯乙烯系阴褰子交换辫脂、D296大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂(南开大学化工厂)，纤维索酶(150 000 U／g)、果胶酶(20 000 U／g)(上海蓝季科技发展有限公司)，考马斯亮蓝G-250(Fluka进口分装)，其它试剂均为G产分析纯．(2)仪器与设备．高速组织捣撵撰l(DS-1蘩，上海标本模型厂)，电熬逐瀑瘩洛锶(◇K一98一l黧，金坛枣歪基仪器骞限公霭)，离心撬
(TDL一5一A型，上海安亭科学仪器厂)，
旋转蒸发器(RE52～99型，
上海亚荣生化仪器厂)，循环水式多用真空泵(SHB-Ill型，郑州长城仪器厂)，真空冷冻干燥机(Flexi—dry systems，Stone Ridge。NewYork。made inUSA)，布氏灞斗，35 minx400 mm层斩柱，紫羚分光巍度计(3 300 RKD羹，索氏提取器)．
1．2 LPS的粗提取
(1)酶提法提取LPS．准确称取海带，加入15倍的水，用高速组织捣碎机捣碎，依次加入纤维素酶0。25 g，果胶酶0。5 g，瀵匀，将pH篮漏**4．0，予40℃"-50℃水浴4 h，再升涅**80℃30 mim，使酶灭活，待冷却后收集滤液，将滤渣水洗两次合并滤液．所得滤液调pH值**7．0，经减压蒸馏浓缩**原体积的l／4～1／5，5 000 r／min离心15 min去除不溶性杂质．上清液加无水乙醇**总体积的30％，静置沉淀4 h，离心去除不溶物．上清液加无水乙醇**总体积的60％，低温过夜沉淀多糖后离心，沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮洗数次，冷冻干燥得LPS粗品．(2)水提法提取LPS．准确称取海带，加入20倍的水，用高速组织捣碎机捣碎．然后在70℃水浴中抽提4 h，其它步骤与酶解工艺相同．
1．3 LPS的初步纯化
(1)CTAB沉淀硫酸化多糖．将酶解法所提LPS粗品用适量蒸馏水溶解，加入2％的CaCl：静置2 h，5 000 r／rain离心15 min去除粗糖液中残留的褐藻胶，上清液加5％十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀酸性硫酸多糖．沉淀用3％的KCl溶解后，用三倍体积的乙醇沉淀，5 000 r／min离心15 min，沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮洗数次，冷冻干燥．(2)大孔吸附树脂脱色．取100 ml浓度为1％的粗多糖液加入1g处理过的树脂，放人恒温摇床，丁=30℃、120 r／rain、10 h，脱色后多糖液经双层滤纸过滤后，测定色素吸光值及糖含量，计算实验前后的溶液的脱色率及多糖回收率Is3，并对所选树脂脱色效果的因素进行研究
1．4 LPS成分的测定
(1)多糖含量的测定．总糖含量测定采用蒽酮硫酸法[6]，还原糖含量测定采用3，5一二硝基水杨酸(DNS)比色法[7]，均用葡萄糖作为对照品做标准曲线．
(2)蛋白质含量的测定．采用考马斯亮兰比色法[8]，以牛血清白蛋白做标准品绘制标准曲线．
(3)硫酸根含量测定．采用比浊法[9]，以硫酸钠做标准品绘制标准曲线．
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