上海亚荣旋转蒸发器比色法测定麦冬果实中总皂苷元含量中的应

1仪器与试药
 
TU一1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),数显恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司),TB一215D型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),LD-02型二两装高速中药粉碎机(中国温岭市大海药材器械厂),RE一52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);麦冬果实采于济宁医学院日照校区,经济宁医学院生药学教研室鉴定为百合科植物麦冬(Ophiopogonjaponicus(Thunb)Ker—Gawl)的果实,对照品薯蓣皂苷元来源于江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究中心,5%香草醛溶液(0.59香草醛溶于10mL冰醋酸;新鲜配制),其他试剂均为分析纯。
 
2实验与方法
 
2.1对照品溶液的制备
 
精密称取干燥**恒重的薯蓣皂苷元对照品
15.00rag,加适量甲醇溶解,置于10mL容量瓶中,用甲醇定容**刻度,摇匀。精密吸取1.0mL置于100mL容量瓶中,用甲醇定容**刻度,摇匀,制备成浓度为15/-g/mL的对照品溶液,备用。
 
2.2供试品溶液的制备
 
称取干燥的麦冬果实粉末2.59,置于100mL圆底烧瓶中,加入50mL 70%乙醇,于90℃水浴中回流提取2h,提取2次,抽滤,滤液减压浓缩得浸膏。将浸膏用适量水溶解,依次用氯仿、水饱和正丁醇萃取3次,合并正丁醇萃取液,减压浓缩得总皂苷浸膏。向总皂苷浸膏中加入25mL 15%的硫酸溶液,于沸水浴中回流水解3h,冷却**室温,转移**分液漏斗中,用氯仿萃取3次,合并氯仿萃取液,浓缩得总皂苷元浸膏。将总皂苷元浸膏用甲醇溶解,定容**100mL,得供试品溶液,备用。
 
2.3测定波长的选择
分别精密吸取对照品溶液、样品溶液各1.0mL,置于10mL具塞试管中,挥尽溶剂,分别加入5%香草醛溶液0.2mL和高氯酸0.8mL,于70℃水浴上不蜥振摇保温20min,冰浴冷却,加冰醋酸稀释**刻度,立即在紫外分光光度计于200~900nm区间扫描,同时空白溶液作参比。对照品及供试品的**大吸收波长均在453nm,因此选取453nm作为检测波长。
 
2.4标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液1.5,2.0,3.0,4.0,
5.OraL,置于5个10mL具塞试管中,挥尽溶剂,分别加入5%香草醛溶液0.2mL和高氯酸0.8mL,置70℃水浴上不断振摇保温20min,冰浴冷却,加冰醋酸稀释**刻度,摇匀,备用。以5%香草醛溶液0.2mL和高氯酸0.8mL,加冰醋酸稀释**刻度的溶液为空白,在453nm处测定吸收度。以浓度C(t-g/mL)为横坐标,吸收度A为纵坐标,绘制标
准曲线。经线性回归分析处理得到回归方程为:A一0.0492C+0.044(r=0.999)。
说明吸光度与对照品浓度在2.25弘g/mL~7.5/-g/mL范围内呈良好的线性关系。
 
2.5精密度试验
精密吸取对照品溶液2.OraL**lOmL具塞试管中,按“2.4”项下方法显色测定吸收度,连续测定5次,结果RSD为0.093%,可见仪器精密度良好。
 
2.6稳定性试验
精密吸取对照品溶液5.OmL,置lOmL具塞试管中,按“2.4”项下方法显色,并分别在显色后的0,5,10,15,20min测定其吸光度,结果RSD为0.454%,可见本法在显色后20 min内,吸光度值是比较稳定的,测定**好在20min内完成。
 
2.7重现性试验
取药材粉末5份,每份约2.59,按照“2.2样品溶液的制备”步骤,平行制备样品溶液,各吸取1.0mL**5个10mL具塞试管中,按“2.4”项下方法显色测定吸收度,结果样品中总皂苷元平均含量为0.24%,RSD为0.4%。表明方法重现性良好。
2.8加样回收率试验
取已知含量的药材粉末6份,每份约0.59,分别加入1.5mg/mL的对照品溶液0.8mL,按照“2.2样品溶液的制备”步骤,平行制备样品溶液,各精密吸取样品溶液2.0mL置于6个10mL具塞试管中,按“2.4”项下方法显色测定吸收度,结果见表1。
 
2.9样品含量测定
分别取采集于向阳山坡地、楼后背阴处的两批药材2.59,依“2.2”项下方法制备供试品溶液,各精密吸取1.OmL,依“2.4”项下方法显色测定吸收度,带入标准曲线公式,计算其总皂苷元平均含量分别为0.24%、0.29%。

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