病毒的浓缩和纯化

收集发病鹅的脾脏、肝脏和肾脏,均浆用1:5稀释(Wt/vol)buffer A (10 Mm Tris-HCl ,100mM EDTA PH=7.2)离心10000 转,30分钟。再加上双抗(10000LU/ML)青霉素和链霉素(1mg/ml)。
病毒浓缩的方法用的是蔗糖梯度离心方法。
首先,10000转离心30分钟,收集上清液,用三氯三氟代乙烷纯化两次为了除去脂层。蔗糖溶液用在下一步的操作中,提前准备buffer A。上清放于30%的蔗糖的溶液中超速离心。上清重新用buffer A悬浮,放于25%-60%的不间断的蔗糖溶液中,超速离心120000转,16小时。离心完后,收集密度差别的液体。测定病毒的浮力的密度。**后,分离的液体带再用1:3 buffer A稀释,离心2小时,120000转。病毒小颗粒用悬200微升水。
 

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