质粒浓缩方法【汇总】

分子克隆有详细的描述,具体步骤如下:
1、估算含有质粒溶液的体积V,加入V/9体积的3M NaAc,(我喜欢在质粒溶液中再加入一定量的水,使得总体积大概在270ul 左右,之后加30ul NaAc)使NaAc终浓度为0.3M。
2、加入2倍体积冰冷无水乙醇,冰上孵育或-20度 20min,
3、**大速度离心10min,
4、用75%乙醇洗涤2次(每次700ul即可),
5、室温晾干,
6、加入适当体积的水或TE buffer溶解即可。
 
 
质粒浓缩的办法总的来说是利用乙醇沉淀DNA的原理进行.首先你应当确定你提取的质粒量有多大,体积多少,这样才好确定浓缩的优化策略,详细步骤介绍如下:
1 确定体积,一般需要加2.5倍原始DNA溶液体积的95%乙醇(如果你提的质粒纯度好的话,可以将乙醇在-20度冰箱预冷后加入效果更好),同时加入1/10倍原始DNA溶液体积的醋酸钠(3M,pH4.8),;
2 离心,以离心机**大速度(13000rpm以上)离心10分钟;
3 倒掉上清,用10ul枪头吸去离心管里剩余的水,但不要吸到DNA;
4 室温放置10~15分钟,直**DNA刚刚晾干,但又不能干透成白色不透明状;
5 用适量去离子水或TE溶解**你所需要的浓度。

为了浓缩达到你所需要的浓度,你应先对质粒定量,如果质粒总量小于2ug,在沉淀时可以加入1ul的糖原,以便于操作。
 
 
biomiga-EndoFree plasmid ezFlow maxi kit(快速法)-内有质粒浓缩方法  注:得到的DNA需要浓缩,请加入0.1倍体积的3M的醋酸钠(pH5.2)和0.7倍体积的异丙醇,室温10min,室温下高速离心10分钟,底部可见白色的DNA沉淀,弃去上清,加入1 mL70%乙醇,高速离心5分钟,弃去上清,空气干燥20分钟,加入Endofree Elution Buffer重新溶解质粒DNA。   沉淀DNA时,醋酸钠和异丙醇一定要用常温的否则盐可能也被沉淀下来。   
 
如果提取的不是特别微量的样品, 乙醇或异丙醇沉淀的时间**好不要太长, 因为过长时间的沉淀会造成沉淀中的盐分升高, 影响PCR和酶切.
因此我个人都是:genomic DNA: 2V乙醇+0.1V 3M NaAc,室温10min; plasmid(碱裂解法):2V乙醇/1V异丙醇,室温10min;  RNA: 1V异丙醇,室温5min(很多国外RNA相关实验的Kit专门说明了不要超过5min,否则有可能影响后续实验).  低温有助于低丰度/小片段沉淀, 因此可以据具体情况-20度沉淀,但沉淀的时间**好不要太长, 事实上长时间不会对沉淀量有质的改变,因此结合保证质量和提高效率两大原则,不要选择长时间沉淀.  当室温静置片刻后离心,看不见沉淀,大可以再移入 -20C 处理的。
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