黄芩中黄芩苷的提取和精制

一、 实验目的
1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、 实验原理
  
黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物, 具有一定的脂溶性, 所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。
黄芩苷为葡萄糖醛酸苷, 具有弱酸性, 其可在碱性溶液中溶解, 形成钠盐,在提取液中加酸酸化,使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱,不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离,进行精制。
本实验选用了60%乙醇回流提取,酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制,并对精制品进行了简单的定性鉴别,没有对照品,所以没做定量实验。
三、实验材料与仪器
  材料:黄芩干燥根,硅胶G薄层层析板
 仪器:UV2550紫外可见分光光度计(日本岛津),Spectrum 100傅立叶红外光谱仪,旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂),LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医用分析仪器厂),200g摇摆式高速中药粉碎机,电子天平,循环水式真空泵,抽滤装置,圆底烧瓶(500ml),水浴锅,冷凝管,索氏提取器,层析缸
  试剂:2mol/L盐酸,60%乙醇,10%氢氧化钠,乙酸乙酯,甲醇,甲酸
四、 实验步骤
1 黄芩苷的提取
将黄芩干燥根粉碎,称取粗粉100g,装入1L的圆底烧瓶,加入4倍量即400ml的60%乙醇,搅拌均匀,90℃回流提取1h。提取完进行抽滤,将滤渣倒入圆底烧瓶中,加300ml 60%乙醇继续回流30min,重复上一步再回流30min。合并3次滤液,65℃减压浓缩**无醇味,将水液水浴加热到80℃,用2mol/L的盐酸调PH**1~2,保温30min,室温静置12h,沉淀,2000r/min离心2min,弃上清,向沉淀中加10倍水量即
700ml,搅拌均匀,加10%氢氧化钠调PH**7,静置1h,2000r/min离心2min,弃沉淀,将上清液加热**40℃,搅拌均匀,加入等体积即700ml的60%乙醇,静置1h,2000r/min离心2min,弃沉淀,将上清液水浴加热**80℃,用2mol/L的盐酸调PH**1~2,保温30min,室温静置1h,沉淀,离心,弃上清液,得粗黄芩苷湿重43g。
2 黄芩苷的精制
  向粗黄芩苷中加入7倍水量即300ml,水浴加热**70℃,10%氢氧化钠调PH**7,完全溶解后,用2mol/L的盐酸调PH**6,加乙醇**含醇量70%,未出现明显沉淀,所以没过滤,用2mol/L的盐酸调PH**1~2,70℃保温20min,静置过夜。次日,沉淀很少,又80℃保温30min,离心,弃上清,得精制品,向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇,将精制品装入索氏提取器的滤纸中,加热回流**提取液颜色很浅,趁热抽滤,滤液减压浓缩一半,冷却,静置,结晶析出,静置30min,过滤,甲醇洗涤,得黄芩苷再精制品。用40倍量甲醇加热回流溶解,重复上述步骤可得黄芩苷重结晶。
3 黄芩苷的薄层层析
  吸附剂:硅胶G薄层层析板,厚0.25~0.3mm
  展开剂:乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(7:2:0.5:0.5 v/v/v)
  样品配成合适浓度的甲醇液,用点样毛细管点样,每点一次要等到干了才能点下次,点样斑点直径不大于2mm。层析缸用展开剂饱和20min后,将点样板垂直放入层析缸,上行展开,展层完毕后,取出,晾干,放在254nm紫外灯下观察。
4 黄芩苷的紫外吸收图谱
  取少量黄芩苷重结晶样品于50ml容量瓶中,加甲醇溶解**颜色微黄,用紫外分光光度计在200-400nm进行紫外扫描。
5黄芩苷的红外吸收图谱
  精确称取0.100g的溴化钾,压片测红外作为背景,再精确称取0.100g的溴化钾,加入极少量样品一起研成细粉,压片,测红外吸收图谱。
五、 实验结果
1 黄芩苷得率(%)=M/M0 x 100% 
式中:M一所得黄芩苷精品重量  M0一提取时用黄芩的重量
本实验中M为0.132g,M0为100g,所以收率为0.132%。
2薄层层析
 
3 紫外光谱
 
由下图可知在200-400nm内**大吸收波长为278nm,与文献中(上图)的标准品的**大吸收波长一致。
 
4 红外光谱
 
 
                  黄芩苷红外图谱
3339 cm-1,宽峰: -OH伸缩振动
3030 cm-1左右:苯环=CH伸缩振动
2900 cm-1: C-H伸缩振动
1611、1575、1478、1450cm-1 :苯环骨架振动
1736 cm-1 :C=O伸缩振动(葡萄糖醛酸)
1667cm-1: C=O伸缩振动(吡喃酮环)
1363 cm-1 :C-O伸缩振动
1078 cm-1: C-O-C的对称和不对称伸缩振动
900~690 cm-1多个吸收峰:苯环取代
六、 讨论
1由薄层板上的斑点可以看出虽然得到了一个比较明显的斑点,结合紫外图谱应该是黄芩苷,但是斑点上方有小淡斑存在,证明得到的结晶不是很纯。
2 红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合,不一致的原因可能是:黄芩产地不一样;本实验中得到的黄芩苷纯度不高。
3 本实验中产率不高,原因可能有:粗粉未浸泡;静置时间短;调PH时温度控制不好。

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